标准规范下载简介
GBT 40392-2021 循环中军团菌的检测.pdfICS13.060.70;13.060.25 CCS G 76
GB/T40392—2021
循环冷却水中军团菌的检测
01.建筑防火设计规范50016-2014ion of Legionella in circulating cooli
GB/T403922021
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件参考ISO11731：2017《水质军团菌的计数》起草，一致性程度为非等效， 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国石油和化学工业联合会提出。 本文件由全国化学标准化技术委员会水处理剂分技术委员会（SAC/TC63/SC5)归口。 本文件起草单位：石家庄给源环保科技有限公司、江苏省特种设备安全监督检验研究院常州分院， 华测检测认证集团股份有限公司、中海油天津化工研究设计院有限公司、石家庄市疾病预防控制中心 同济大学、天津市疾病预防控制中心、浙江水知音检测有限公司、鞍钢贝克吉利尼水处理有限公司。 本文件主要起草人：李永产、孙小伟、刘文秋、藤厚并、李丽婕、主妍、李风亭、林肖惠、俞明华、孙辉 刘娇娇。
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循环冷却水中军团菌的检测
警告：军团菌是致病菌，使用本文件的人员应有二级生物安全防护实验室工作的实践经验。本文件 并未指出所有可能的安全问题，使用者有责任在处理或检测可疑致病菌时采取适当的预防措施，减少职 业暴露，并保证符合国家有关法规规定的条件
本文件规定了循环冷却水中军团菌的检测方法。 本文件适用于循环冷却水中军团菌的检测，也适用于原水、生活用水、其他工业用水及废水中军团 菌的检测
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 GB/T27405 实验室质量控制规范食品微生物检测
7.1离心机：转速为0r/min～8000r/min。配有300mL～500mL具螺旋盖的离心瓶。 7.2真空泵。 7.3 超声波振荡器或涡旋混合器。 7.4 无菌涂布器。 7.5CO2培养箱：36℃±1℃。 7.6 普通光学显微镜或荧光显微镜。 7.7 紫外线灯：波长为360nm±20nm。 7.8 无菌接种环：直径为3mm。 7.9 无菌平Ⅲ：直径为90mm。 7.10 无菌镊子。 7.11 微量移液器：100μL、200μL。 7.12 无菌微孔滤膜：直径为47mm~50mm，孔径为0.22um或0.45um
7.1离心机：转速为0r/min～8000r/min。配有300mL～500mL具螺旋盖的离心瓶。 7.2真空泵。 超声波振荡器或涡旋混合器。 无菌涂布器。 7.5 CO 培养箱:36 ℃±1 ℃。 7.6音 普通光学显微镜或荧光显微镜。 7.7 紫外线灯：波长为360nm±20nm。 7.8 无菌接种环：直径为3mm。 7.9 无菌平皿：直径为90mm。 7.10 无菌镊子。 7.11 微量移液器：100μL、200μL。 7.12 无菌微孔滤膜：直径为47mm~50mm，孔径为0.22um或0.45um
水样中含有杂质时可静置沉淀或1000r/min离心1min成品保护施工组织设计方案，取上清液备用。
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在真空过滤系统上安装微孔滤膜，取水样上清液200mL～1000mL过滤，记录过滤水样的体积 Vto。过滤后取下滤膜，置于带盖的无菌容器中，用无菌剪刀剪碎，加15.0mL无菌水，放入涡旋混合器 振荡至少2min（也可将容器放人超声波振荡器中振荡2min～10min，稀释液液面应低于超声波振荡 器水面）充分洗脱，作为浓缩液备用，记录体积V。。 当样品中军团菌的菌落数量超过105CFU/L时，可不进行样品浓缩处理，计数时按直接涂布法 计数。
9.2.1将9.1.2的浓缩液（无需浓缩时取原液）分成三份。其中一份不做处理，另两份分别采用热处理 和酸处理方式处理。 9.2.2热处理：移取1.0mL浓缩液（或原液）于一无菌容器中，置于50℃士1℃的水浴中加热30min 9.2.3酸处理：移取3.0mL浓缩液（或原液）于一无菌容器中，加入3.0mL酸缓冲液摇匀，其pH值约 为2.2.放置5min
经处理、热处理、酸处理样品各0.1mL聚苯板（挤塑板）玻纤网格布聚合物砂浆施工工艺，用无菌涂布器 种液均匀涂布于相对应的GVPC培养基平皿的整个表面
将已接种的平板倒置放人CO2培养箱中，调节CO2浓度为2.5%，温度为36℃土1℃，相对湿度 于95%,培养10 d。
培养期间，在第三天开始检查培养皿，并在培养期结束时进行最终检查，记录可疑军团菌菌落的数 量。在平板上生长小于300个菌落为宜，如有天量军团菌生长，则应减少过滤样品的体积或稀释浓缩 液。军团菌的生长可能被其他菌掩盖或抑制，如果怀疑军团菌被抑制应重新处理水样进行培养。 典型的军团菌菌落通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也可能出现棕色、灰绿色、深红色。菌落表面光 滑，边缘整齐，呈典型毛玻璃状。在紫外光下有荧光，荧光的颜色有助于区分样品中军团菌的不同种类。 为了避免军团菌的死亡，不能将平板长时间暴露在紫外灯下，宜在数秒内完成，