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DB32T 4368-2022 饲料中玉米赤霉烯酮的快速检测 时间分辨荧光免疫层析定量法.pdfDB32/T 4368202
饲料中玉米赤霉烯酮的测定
斜坡应急治理工程施工组织设计Determinationofzearalenoneinfeeds Time resolved fluorescence immunochromatography quantitative method
目次前 言III1范围2规范性引用文件3术语和定义4原理.5试剂和材料，6仪器和设备7样品制备8样品前处理9标准曲线制定10检测过程11结果计算12方法性能
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本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：江苏省家禽科学研究所、上海雄图生物科技有限公司。 本文件主要起草人：施寿荣、汪劲能、张鹏飞、肖蕴祺、胡艳、邵丹、沈一茹、张珊、王强
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：江苏省家禽科学研究所、上海雄图生物科技有限公司。 本文件主要起草人：施寿荣、汪劲能、张鹏飞、肖蕴祺、胡艳、邵丹、沈一茹、张珊、王强
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本文件规定了饲料中玉米赤霉烯酮测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、样品前友 理、标准曲线制定、检测过程、结果计算和方法性能， 本文件适用于饲料原料、浓缩饲料、配合饲料、精料补充料等试样中玉米赤霉烯酮的测定。
下列文件申的内容通过文申的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备
GB/T20195动物饲料试样的制备 3语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 时间分辨荧光微球timeresolvedfluorescentmicrosphere 形状为球形，直径在几纳米至几十微米之间，微球表面或内部负载有荧光物质，在受到一定的能 量激发时能够发出荧光的微粒，比普通荧光半衰期长。微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能基 团，用于与蛋白或抗体的共价偶联；微球所包理的镧系稀土元素经过了整合，无需解离增强步骤。 3.2 时间分辨荧光免疫层析定量法timeresolvedfluorescenceimmunochromatography quantitative method 用时间分辨荧光微球标记抗原或抗体制作层析试纸条，根据时间分辨荧光微球的发光特点，用时 间分辨技术测量荧光，同时检测波长 分辨的方法，可有效地排除非特异性荧
下列术语和定义适用于本文件。
形状为球形，直径在几纳米至几十微米之间，微球表面或内部负载有荧光物质，在受到一定 激发时能够发出荧光的微粒，比普通荧光半衰期长。微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功 用于与蛋白或抗体的共价偶联；微球所包理的系稀土元素经过了整合，无需解离增强步骤。
时间分辨荧光免疫层析定量法timeresolvedfluorescence immunochromatography quantitativemethod 用时间分辨荧光微球标记抗原或抗体制作层析试纸条，根据时间分辨荧光微球的发光特点，用时 间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨的方法，可有效地排除非特异性荧 光的干扰，极大地提高了分析灵敏度
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a）正视图 b)侧视图 图1玉米赤霉烯酮时间分辨荧光免疫层析定量试纸条结构示意图
：结合垫包被荧光微球标记的玉米赤霉烯酮抗体，T线包被玉米赤霉烯酮封闭抗原，C线包被二抗
说明：结合垫包被荧光微球标记的玉米赤霉烯酮抗体，T线包被玉米赤霉烯酮封闭抗原，C
本：玉米基质空白样本，玉米赤霉烯酮含量<5
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6.1天平：感量0.01g，最大量程500g。 6.2涡旋振荡器：0r/min～2500r/min。 6.3离心机：转速≥4000r/min。 6.4微量可调移液器：20μL～200μL，0.1mL～1mL。 6.5干式恒温孵育器：37.0℃土2.0℃（不带鼓风）。 6.6时间分辨荧光免疫定量分析仪：激发波长：365nm±5nm、发射波长：615nm±5nm，用于 读取试纸条的荧光信号并自动计算定量的检测结果。
安GB/T14699.1取样，按照GB/T20195制样，备用。
8.1称取1.0g土0.02g样品于10mL离心管中，用移液器（6.4）加入5mL提取液（5.10），用 涡旋振荡器（6.2）振荡提取5min，用离心机（6.3）4000r/min离心1min，上清备用；如果样品 浓度过高，用提取液（5.10）稀释。 8.2取100μL样品提取液（8.1），加入到600μL稀释液（5.11），混匀后待点样检测。
9.1空白基质溶液制备：取10g阴性样品于100mL离心管中，加入50mL提取液（5.10），用涡旋 振荡器（6.2）振荡提取5min，用离心机（6.3）4000r/min离心1min，上清备用。 9.2分别吸取玉米赤霉烯酮标准储备液（5.13）0.000mL、0.004mL、0.010mL、0.020mL、0.060 mL、0.120mL、0.200mL、0.300mL、0.400mL于5mL容量瓶中，用空白基质溶液（9.1）定容，分 别相当于0ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1000ng/mL、1500 ng/mL和2000ng/mL浓度标准工作溶液。 9.3取100μL标准工作液（9.2）分别加入600μL稀释液（5.11），混匀后由低浓度到高浓度进 行检测（10）。仪器软件可根据T线信号值与C线信号值的比值（T/C）和标准工作溶液浓度的自然对 数值（Inc）建立标准曲线。 9.4同批次试纸条只需建立一次标准曲线，将建立好的标准曲线与项目信息存储于ID卡中，便于样 品随时随地检测。
.1将干式恒温孵育器（6.5）开机，设置温度37℃，待温度升至37℃后方可使用。 0.2时间分辨荧光免疫定量分析仪（6.6）预热5min后，插入试纸条所对应的ID卡（5.14）
环境保护施工组织设计DB32/T43682022
10.3从铝箔袋中取出玉米赤霉烯酮荧光免疫定量检测试纸条（5.15），水平放置于干式恒温孵育器 (6.5） 0.4用移液器（6.4）吸取100μL经过前处理的待测样品（8.2）加入试纸条的加样孔中，盖上孵 育器盖开始计时孵育6min。 10.5孵育结束后将试纸条（5.15）插入荧光免疫定量分析仪（6.6）的试纸条插槽中，点击读数。
10.3从铝箔袋中取出玉米赤霉烯酮荧光免疫定量检测试纸条（5.15），水平放置于干式恒温孵育器 (6.5）。 10.4用移液器（6.4）吸取100μL经过前处理的待测样品（8.2）加入试纸条的加样孔中，盖上孵 育器盖开始计时孵育6min。 10.5孵育结束后将试纸条（5.15）插入荧光免疫定量分析仪（6.6）的试纸条插槽中，点击读数。
样品中玉米赤霉烯酮含量以质量分数X计，数值以微克每千克（μg/kg）表示。仪器按如下 动计算。
深圳河第三期疏浚工程施工组织设计PxVxnx1000 mx1000
式中： P一从标准曲线上查得的待测液中玉米赤霉烯酮含量的数值，单位为纳克每毫升（ng/mL)； V一样品待测液体积的数值，单位为毫升（mL）： n一样品稀释倍数； m一样品质量的数值，单位为克（g）。 计算结果保留至小数点后两位。