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JJF 1826-2020 空气微生物采样器校准规范.pdfJJF 18262020
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连霍高速洛三灵段改扩建工程TJ-22标施工组织设计(定稿)空气微生物采样器校准规范
3.1生物气溶胶bioaerosol
生物粒子悬浮于空气中形成的胶体系统，即含有生物性粒子的气溶胶。包括细菌、 病毒以及致敏花粉、霉菌孢子和蕨类孢子等，除具有一般气溶胶的特性以外，还具有传 染性、致敏性等。
3.2活个体viableunit.VU
一个或多个活粒子（粒子可包含一个或多个活微生物），当被计数为1个时，称为1 个活个体。 注：当活个体的数量是对琼脂培养基上的菌落来计数时，通常称为菌落形成单位（colony formingunits，CFU）。一个CFU可以包含一个或多个VU。 3.3采样物理效率physicalefficiencyofsampling 采样器对不同粒径粒子的采集效率。 注：粒子可以是微生物、携带微生物的粒子或无生命力的粒子。对粒径相同的以上粒子，采 样物理效率相同。
空气微生物采样器（以下简称采样器）是专门用于采集空气中微生物的采样仪器。 它基于安德森撞击法原理，按一定流量抽取空气，使气流中的微生物粒子加速撞击到含 营养琼脂培养基的培养皿表面，经培养形成肉眼可见的菌落，对菌落数进行计数并根据
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采样体积计算空气中活个体的浓度。 采样器通常由保护盖、采样头（包括筛孔式、放射狭缝式、离心式等）、采样泵、数 据处理系统以及显示系统等部分组成
采样物理效率：（50～110）%。 注：以上指标不用于合格性判别，仅供参考。
6.1.1 仪器周围不得有明显的机械振动，无电磁干扰。 6.1.2 环境温度： （15~35）℃。 6.1.3相对湿度：≤85%。 6.1.4电源电压： （220±22）V；频率：（50±1）Hz
6.2标准物质及其他设备
6.2.1流量校准装置
最大允许误差：土0.5
6.2.3萎缩芽孢杆菌（Bacillusatrophaeus）有证标准物质 (10°~10°）CFU/mL，Urel≤25%（k=2)。
6.2.4单分散气溶胶发生器
6.2.4单分散气溶胶发生器
可产生（0.7~15）μm粒径的单分散粒子
6.2.5膜过滤法采样器
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使用0.8μm孔径的滤膜（可为硝酸纤维素等材质），对0.9μm标准粒子 率不低于99%，流量最大允许误差±5%。
6.2.6采样器采样效率测试仓
仓内温度保持在（22土2）℃，相对湿度保持在（50土10）%，含微生物的粒 胶分布均匀。
6.2.7微生物恒温培养箱
温度偏差：±1.0℃
6.2.8全自动菌落计数器 示值最大允许误差：土5%。 6.2.9空气颗粒物粒子计数器 示值最大允许误差：土30%FS。 6.2.10空气动力学粒径谱仪 示值最大允许误差：土20%。 6.3试剂及培养基 6.3.1无水乙醇：分析纯。 6.3.2蒸馏水。 6.3.3碘化钾：分析纯。 6.3.4胰蛋白陈大豆
6.2.8全自动菌落计数器
示值最大允许误差：土30%FS。 6.2.10空气动力学粒径谱仪 示值最大允许误差：土20%。 6.3试剂及培养基 6.3.1无水乙醇：分析纯。 6.3.2蒸馏水。 6.3.3碘化钾：分析纯。 6.3.4胰蛋白陈大豆营养琼脂培
被校采样器按说明书预热，取下保护盖，放置好配套的平皿，运行稳定后，用流量 交准装置测量被校采样器流量，测量3次。按公式（1）、公式（2）计算流量示值误 差Q：
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按7.1的方法，测量10次，重复性以单次测量的相对实验标准偏差表示。按公
式中： Q;一一被校采样器流量每次的测量值，L/min； 0一一被校采样器流量10次测量值的平均值，L/min
被校采样器按说明书预热，取下保护盖，放置好配套的平血，运行稳定后，用流量 交准装置测量被校采样器流量Q.并开始计时，每隔1min记录一次流量数值共记录 5min。取6个读数中的最大值和最小值，按公式（4）计算流量稳定性S：
式中： Q。—一被校采样器流量初始测量值，L/min； Qmax—一被校采样器流量最大测量值，L/min；
设定被校采样器采样时间5min，同时启动秒表和被校采样器，待被校采样器到达设 定的采样时间时，停止秒表计时，重复测量3次，取其平均值进行计算，按公式（5）、 公式（6）计算计时误差△t：
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式中： to一—被校采样器设定的采样时间，s； ti、t2、t，一—秒表3次测量时间值，s； 1. 被校采样器采样时间标准值，s。
此项指标在必要时或依据客户要求，根据客户环境中典型微生物的粒径，选择其中 采样物理效率的校准
7. 5. 1 测试方法
7.5.1.1在采样器采样效率测试仓内，依次把按附录A制备的5种不同浓度的菌株悬浮 夜置于单分散气溶胶发生器中，通过控制单分散气溶胶发生器的进液流速和发生器振动 频率，依次分别产生粒径介于（0.7~15）μm的5种粒子，如粒径约为0.9μm、1.3μm 2μm、5μm、13μm的单分散气溶胶粒子，保持气溶胶粒子的悬浮状态并且均匀分 布。依据附录B的方法计算不同浓度碘化钾乙醇溶液产生的含微生物粒子气溶胶的质量 中值直径或空气动力学直径。将两台空气颗粒物粒子计数器分别置于测试仓内被校采样 器和膜过滤法采样器位置处，测定粒子浓度，以确保二者一致性偏差小于土20%。 7.5.1.2被校采样器和膜过滤法采样器距离单分散气溶胶发生器为（0.8～1）m，并与 其喷口同高，三者呈半圆形分布，发生器位于半圆弧线的中间，两个采样器分别位于半 圆弧线的起点和终点。启动单分散气溶胶发生器5S后，同时开启被校采样器和膜过滤 法采样器，两个采样器各采集100L的气体。膜过滤法采样器采取侧吸的方式。被校采 样器将粒子采集到依据附录C配制的胰蛋白陈大豆营养琼脂培养基上，膜过滤法采样器 将粒子采集到滤膜上。对每种粒径各进行10次采集实验。每次采集后，启动测试仓的 通风系统，对仓内空气进行更新，通风时间以仓内空气不影响下次测量为准。 7.5.1.3把7.5.1.2中膜过滤法采样器采集的滤膜小心取下，采集面朝上放在胰蛋白陈 大豆营养琼脂培养基上，和被校采样器采集的胰蛋白大豆营养琼脂培养基一起放入微 生物恒温培养箱，在（37土2）℃下培养至少18h。每个培养皿上的菌落数为（50～ 200）CFU
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7.5.1.4用肉眼或全自动菌落计数器计数可见菌落。菌落数的计数和表示采用活个体数 （VU）
7.5. 2 结果计算
对某粒径的粒子，被校采样器10次测量的VU平均值除以膜过滤法采样器10次测 量的VU平均值，乘以100%得出被校采样器对此粒径粒子的采样物理效率（P），按公 式（7)计算：
式中： VUrs一一被校采样器对某粒径粒子10次测量的VU平均值；
VUTS ×100% VUMS
校准结果应在校准证书上反映，校准证书应至少包括以下信息： a）标题，如“校准证书”； 实验室名称和地址； 进行校准的地点（如果与实验室的地址不同）； d） 证书或报告的唯一性标识（如编号），每页及总页数的标识； e） 客户的名称和地址； 被校对象的描述和明确标识； g）进行校准的日期，如果与校准结果的有效性和应用有关时，应说明被校对象的 接收日期； h 如果与校准结果的有效性和应用有关时，应对被校样品的抽样程序进行说明 i） 校准所依据的技术规范的标识，包括名称及代号； j） 本次校准所用测量标准的溯源性及有效性说明； k） 校准环境的描述； 1） 校准结果及其测量不确定度的说明； 对校准规范的偏离； 校准证书或校准报告签发人的签名、职务或等效标识、以及签发日期： o）校准结果仅对被校对象有效的声明；
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验室书面批准，不得部分复制证书的声明
采样器的复校时间间隔建议为1年。由于复校时间间隔的长短是由采样器的使用情 况、使用者、仪器本身质量等诸因素所决定的，因此送校单位可根据实际使用情况自主 快定复校时间间隔。如果对采样器的检测数据有怀疑或仪器更换主要部件及修理后应对 采样器重新校准。
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取（10°～10"）CFU/mL的萎缩芽孢杆菌孢子悬浮液1mL，分别放在5支灭菌的离 心管中离心，弃去上清液得到孢子。分别分散在9mL的碘化钾质量浓度分别为0%、 0.007%、0.07%、0.7%和7%的80%乙醇溶液中，制备成孢子浓度为105CFU/mL的5种悬 浮液。
B.1多级颗粒物撞击采样器测定法
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含微生物粒子气溶胶直径的测定方法
B.2 粒径谱仪测定法
也可采用测定粒径范围包括（0.5～20）μm的空气动力学粒径谱仪测定单分散气 溶胶的空气动力学粒径
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流量示值误差测量结果的不确定度评定示例
按规范要求，用流量校准装置测量被校采样器流量，重复测量3次，计算流量示 差。
式中： Q一—被校采样器流量设定值，L/min。 Q、一被校采样器流量标准值，L/min。
AQ= ×100% Qs
则由公式(D.1)得：Q为采样器流量设定值，是一常数，因此不确定度来源仅 为采样器流量标准值Q引入。则标准不确定度计算公式：
其中：灵敏系数c= Q D OQs Q2
u(Q) = cu(AQs)
流量（量值）测量不确定度的来源有： 一流量校准装置引入的不确定度； 环境条件、人员操作和被校仪器等各种因素引入的不确定度
D.5输入量的标准不确定度分量评定
D.5.1流量校准装置引入的标准不确定度u(Qs
流量校准装置的相对扩展不确定度为1.5%，包含因子k=2。则流量校准装置引入的 标准不确定度分量为：
0.5.2重复性引入的标准不确定度u（Qs）
5.2重复性引入的标准不确定度u,Qs）
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评定。 采样器流量设定为100L/min，对采样器进行10次重复测量，流量校准装置的实际 流量分别为99.1L/min、99.2L/min、99.1L/min、99.5L/min、99.3L/min、99.2L/min 99.1L/min、99.4L/min、99.5L/min、99.2L/min，平均值为99.3L/min。 因此被校采样器流量示值单次测量的实验标准偏差为s=0.16L/min。实际校准中重 复测量3次取平均值，因此被校采样器流量标准值重复测量引入的标准不确定度分量 为：
D.5.3标准不确定度汇总
标准不确定度汇总于表D.1。
u (os)= 0.16L/min =0.09L/min /3
表D.1标准不确定度一览表
D.6合成标准不确定度
(Q) = V[c(Qs(Qs) + [c(Qs)u2(s) 100L/min × (0.75L / min)² 100L/min × (0.09L / min)2 (99.3L / min)2 (99. 3L / min)2 = 0. 76%
U=k×u.(AQ)=2×0.76%=1.6% (k=2)
被校采样器的采样物理效率（P.）：
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采样物理效率测量结果的不确定度评定示例
VUTS P × 100% VUMS
VUTs一一被校采样器的VU平均值； VUys一一膜过滤采样器的VU平均值。 采样物理效率（P。）的不确定度来源包括：A类不确定度urep，由10次测量的重复 性引入；B类不确定度包括两个采样器位置粒子浓度差异引入的相对标准不确定度ups 和全自动菌落计数器计数引入的相对标准不确定度u。将以上不确定度分量进行合成， 得到合成标准不确定度u（P）
u(P) = urep + ue + u?
= k × u.(P.) (k=2)
表E.1对不同粒径粒子10次测量的重复性引入相对不确定度分量U
宁夏水利工程施工组织设计JJF 18262020
不确定度分量及合成的扩展不确定度如表E.3所示。
表E.3不确定度分量及合成的扩展不确定度一览表
JJF1826—2020附录 F空气微生物采样器校准记录格式（供参考）原始记录编号：证书编号：校准日期：年月日仪器型号制造厂商仪器编号委托单位温度℃相对湿度%校准员核验员校准地点校准技术依据测量不确定度/准确度等级有效期名称型号仪器编号证书编号标准/最大允许误差至及仪器设备1.流量示值误差标称值/（L/min）测量值/（L/min）平均值/（L/min）示值误差/%校准不确定度232.流量重复性测量值/（L/min）平均值/（L/min）重复性/%9103.流量稳定性测量值/（L/min）稳定性/%O min1 min2 min3 min4 min5 min4.计时误差设定值/s测量值/s平均值/s计时误差/s12315
中建施工现场安全防护施工方案（51P）.docJJE 18262020
附录 G校准证书（内页）格式（供参考）校准结果校准项目校准结果标称值测量值示值误差流量示值误差流量示值误差测量结果的不确定度：流量重复性流量稳定性计时误差粒径μm采样物理效率P±U%17