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GB／T 39303-2020 废水处理系统微生物样品前处理通用技术规范.pdfICS19.020;07.100.01 G 76
GB/T39303—2020
废水处理系统微生物样品前处理
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会（SAC/TC63）归口。 本标准起草单位：南京大学、南京大学宜兴环保研究院、南京江岛环境科技研究院有限公司、中海油 天津化工研究设计院有限公司、蓝保（厦门）水处理科技有限公司、东莞理工学院、国网天津市电力公司 电力科学研究院、石家庄给源环保科技有限公司、珠海京工检测技术有限公司。 本标准主要起草人：任洪强、何席伟、张徐祥、白莹、吕奋勇、牛军峰、苏展、耿金菊、李永广、王庆 王磊、吴兵。
GB／T50328-2001建设工程文件归档整理规范本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起章 本标准由中国石油和化学工业联合会提出。 本标准由全国化学标准化技术委员会（SAC/TC63）归口。 本标准起草单位：南京大学、南京大学宜兴环保研究院、南京江岛环境科技研究院有限公司、中海油 天津化工研究设计院有限公司、蓝保（厦门）水处理科技有限公司、东莞理工学院、国网天津市电力公司 电力科学研究院、石家庄给源环保科技有限公司、珠海京工检测技术有限公司。 本标准主要起草人：任洪强、何席伟、张徐祥、白莹、吕奋勇、牛军峰、苏展、耿金菊、李永广、王庆 王磊、吴兵
GB/T393032020
废水处理系统微生物样品前处理 通用技术规范
废水处理系统微生物样品前处理 通用技术规范
废水处理系统微生物样品前处理
本标准规定了废水处理系统中微生物样品的现场处理、微生物菌种分离与保藏、微生物样品宏基因 组DNA提取以及微生物样品的保存。 本标准适用于采用生物处理工艺（活性污泥法工艺和生物膜法工艺）的废水处理系统中微生物样品 的现场处理、提取与保存。
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 HJ91.1污水监测技术规范 SN/T2632微生物菌种常规保藏技术规程
下列缩略语适用于本文件。 CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethylammoniumbromide） DNA：脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid)
下列缩略语适用于本文件。 CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethylammoniumbromide） DNA：脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleicacid)
7.1.1样品的现场处理包括样品的分装、固定与现场保存，样品包括水样、活性污泥样品以及生物膜 样品。 7.1.2采样前应了解废水处理系统的处理工艺、废水类型和废水排放规律等情况，并按HJ91.1的规定 进行采样。 7.1.3用于分样和装样的器具均应灭菌处理，如现场条件无法实现.应用75%乙醇溶液擦拭后使用
.1.1样品的现场处理包括样品的分装、固定与现场保存，样品包括水样、活性污泥样品以及生 羊品。 .1.2采样前应了解废水处理系统的处理工艺、废水类型和废水排放规律等情况，并按HJ91.1的 #行采样。 .1.3用于分样和装样的器具均应灭菌处理，如现场条件无法实现，应用75%乙醇溶液擦拭后使用
将无菌滤膜置于砂芯过滤器内，使用真空泵对水样进行抽滤。滤膜的过水量视水样的浑浊程度而 重常进水水样每张滤膜的过水量为50mL～200mL，出水水样每张滤膜过水量为500mL~1000ml 羊过滤应于2h内完成。过滤后，将滤膜放入50mL离心管中，于1℃~5℃保存，
7.2.2用于宏基因组DNA提取的水样处理
2.2.1按7.2.1操作将水样进行过滤处理，过滤后，将滤膜放入50mL离心管中DL T2233-2021 110kv-500kv交联聚乙烯绝缘海底电缆系统预鉴定试验规程.pdf，于一20℃保存。 .2.2.2若水样不能进行现场过滤，应将水样置于1℃～5℃保存，并于24h内带回实验室进行 处理。
7.3活性污泥样品的现场处理
将采集的泥水混合物静置5min～15min至泥水产生明显分层，弃去上层清液，将下层活性污泥装
GB/T39303—2020
沉淀用于宏基因组DNA提取。 9.2.3生物膜前处理：对于从填料或生物转盘上刮下的生物膜，若经过固定，则将混合物于8000r/min 下离心分离10min，弃去上层清液，沉淀用于宏基因组DNA提取，未经固定的生物膜可直接用于宏基 因组DNA提取；对于填料附着型生物膜，将填料浸泡于装有生理盐水的三角瓶中，振荡制成菌悬液，于 3000r/min下离心分离10min后弃去上层清液，沉淀用于宏基因组DNA提取，
9.3宏基因组DNA提取
9.4.1水样按7.2.2或9.2.1处理后，将含菌滤膜或沉淀于一20℃或一80℃保存。 9.4.2活性污泥和生物膜样品分别按9.2.2和9.2.3处理后，于一20℃或一80℃保存。 9.4.3DNA样品保存前应分装多份，于一20C或一80℃保存HJ 772-2022 生态环境统计技术规范 排放源统计.pdf，避免反复冻融。
将所提取的微生物样品种类、DNA浓度、纯度、保存方式等相关参数记录于废水处理系统微生物样 品宏基因组DNA记录表（参见表A.3）
GB/T393032020附录A（资料性附录）废水处理系统微生物样品前处理记录表表A.1～表A.3给出了废水处理系统微生物样品现场处理、菌种分离、宏基因组DNA提取记录表格式。表A.1废水处理系统微生物样品现场处理记录表第贡共页时间：地点：废水处理厂名称：工艺类型：样品编号采样位点样品类型采样方式样品体积处理方式保存方式备注采样人记录人校对人表A.2废水处理系统微生物分离鉴定记录表第页共页样品编号菌株编号菌株种属蘭株来源培养基培养温度分离日期保存方式备注操作人校对人7