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HJ 347.2-2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法

适用范围 规范性引用文件 ? 术语和定义， 方法原理 干扰和消除.. 试剂和材料. 仪器和设备. 样品， 分析步骤 10结果计算与表示. 11精密度和准确度 12质量保证和质量控制， 13废物处理 附录A（资料性附录）最大可能数（MPN）表 附录B（资料性附录）粪大肠菌群检验记录及报告推荐格式

水质粪大肠菌群的测定多管发酵法

粪大肠菌群的测定多管发酵

本标准规定了测定水中粪大肠菌群的多管发酵法 本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定 本方法的检出限：12管法为3MPN/L：15管法为20MPN/L。

本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件DL／T 5161.11-2018 电气装置安装工程质量检验及评定规程 第11部分：通信工程施工质量验收，其有效版本适用于本 标准。 GB/T14581水质湖泊和水库采样技术指导 HJ494水质采样技术指导 HJ/T 91地表水和污水监测技术规范

下列术语和定义适用于本标准。 3.1 粪大肠菌群fecalcoliforms 又称耐热大肠菌群（thermotolerantcoliforms）。44.5℃培养24h，能发酵乳糖产酸产气 的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3.2 最大可能数mostprobablenumber（MPN） 又称稀释培养计数，是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学原理，根据一定体 积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估算一定体积样品中目标微生物 存在的数量（单位体积存在目标微生物的最大可能数）

将样品加入含乳糖蛋白陈培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中 生长紧殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使漠甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入 到管中，指示产气。44.5℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长， 最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂，实验用水为蒸馏 水或去离子水。

6.1乳糖蛋白陈培养基

蛋白陈 10g 牛肉浸膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml 将蛋白陈、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000ml水中，调节pH至7.2～7.4， 再加入1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1ml，充分混匀，分装于含有倒置小玻璃管的试管中，115℃ 高压蒸汽灭菌20min，储存于冷暗处备用。也可选用市售成品培养基。 6.2三倍乳糖蛋白陈培养基：称取三倍的乳糖蛋白陈培养基（6.1）成分的量，溶于1000ml 水中，配成三倍乳糖蛋白陈培养基，配制方法同上。 6.3EC培养基

将蛋白陈、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000ml水中，调节pH至7.2～ 再加入1.6%漠甲酚紫乙醇溶液1ml，充分混匀，分装于含有倒置小玻璃管的试管中， 高压蒸汽灭菌20min，储存于冷暗处备用。也可选用市售成品培养基。 6.2三倍乳糖蛋白陈培养基：称取三倍的乳糖蛋白陈培养基（6.1）成分的量，溶于100 水中，配成三倍乳糖蛋白陈培养基，配制方法同上。 6.3EC培养基

6.8乙二胺四乙酸二钠溶液：P（C1oH14N2O:Na2:2H2O）=0.15g/ml

安四乙酸二钠溶液：P（C1oH14N2O:Na2:2H20）=0.15g/ml

称取15g乙二胺四乙酸二钠（6.6），溶于适量水中，定容至100ml，此溶液可保存30d.

7.1采样瓶：500ml带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。 7.2高压蒸汽灭菌器：115℃、121℃可调。 7.3恒温培养箱或水浴锅：允许温度偏差37℃土0.5℃、44℃土0.5℃。 7.4pH计：准确到0.1pH单位。 7.5接种环：直径3mm。 7.6试管：300ml、50ml、20ml。 7.7一般实验室常用仪器和设备。 注：玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎，121℃高压蒸汽灭菌20min备用

采样后应在2h内检测CJJ／T 162-2011 城市轨道交通自动售检票系统检测技术规程，否则，应10℃以下冷藏但不得超过6h。实验室接样后，不能 立即开展检测的，将样品于4℃以下冷藏并在2h内检测

9. 1. 115 管法

将样品充分混匀后，在5支装有已火菌的5ml倍乳糖蛋日陈培养基（6.2）的试管中 （内有倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白 陈培养基（6.1）的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭 菌的10ml单倍乳糖蛋白陈培养基（6.1）的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样 品0.1ml。 对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样 品稀释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml、1ml和0.1ml。15管法样品接种量 参考表见表1。 当样品接种量小于1m时，应将样品制成稀释样品后使用。按无菌操作要求方式吸取 0ml充分混匀的样品，注入盛有90ml无菌水（6.4）的三角烧瓶中，混匀成1:10稀释样品 吸取1:10的稀释样品10ml注入盛有90ml无菌水的三角烧瓶中，混匀成1:100稀释样品。 其他接种量的稀释样品依次类推。 注：吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换移液管。 生活饮用水等清洁水体也可使用12管法

表115管法样品接种量参考表

9. 1. 212 管法

将样品充分混匀后，在2支装有已灭菌的50ml三倍乳糖蛋白陈培养基（6.2）的大试管 中（内有倒管）GB／T 50106-2010 建筑给水排水制图标准，按无菌操作要求各加入样品100ml，在10支装有已灭菌的5ml三倍乳糖 蛋白陈培养基（6.2）的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml